葡萄糖氧化酶法測量血糖濃度的詳細介紹！包括所用化學試劑、儀器、測量條件、操作步驟、注意事項、誤差控制等！越詳細越好！非常感謝！

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葡萄糖氧化酶法測定血清（漿）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并釋放過氧化氫。過氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受體存在時將過氧化氫分解為水和氧，并使色原性氧受體4-氨基安替比林和酚去氫縮合為紅色醌類化合物，即Trinder反應。紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖含量成正比。【試劑】 1．0...

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葡萄糖氧化酶法測定血清（漿）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并釋放過氧化氫。過氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受體存在時將過氧化氫分解為水和氧，并使色原性氧受體4-氨基安替比林和酚去氫縮合為紅色醌類化合物，即Trinder反應。紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖含量成正比。【試劑】 1．0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0) 稱取無水磷酸氫二鈉8.67g及無水磷酸二氫鉀5.3g溶于蒸餾水800ml中，用1mol/L氫氧化鈉(或1mol/L鹽酸)調pH至7.0，用蒸餾水定容至1L。 2．酶試劑 稱取過氧化物酶1 200U，葡萄糖氧化酶1 200U，4-氨基安替比林10mg，疊氮鈉100mg，溶于磷酸鹽緩沖液80ml中，用1 mol/L NaOH調pH至7.0，用磷酸鹽緩沖液定容至100ml，置4℃保存，可穩(wěn)定3個月。 3．酚溶液 稱取重蒸餾酚100mg溶于蒸餾水100ml中，用棕色瓶貯存。 4．酶酚混合試劑 酶試劑及酚溶液等量混合，4℃可以存放1個月。 5．12mmol/L苯甲酸溶液 溶解苯甲酸1.4g于蒸餾水約800ml中，加溫助溶，冷卻后加蒸餾水定容至l L。 6．100mmol/L葡萄糖標準貯存液 稱取已干燥恒重的無水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液約70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 7．5mmol/L葡萄糖標準應用液 吸取葡萄糖標準貯存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度，混勻。【操作步驟】 1．自動分析法 按儀器說明書的要求進行測定。 2．手工操作法取試管3支，按下表操作。葡萄糖氧化酶法測血糖操作步驟加入物(ml)空白管標準管測定管血清－－0.02葡萄糖標準應用液－0.02－蒸餾水0.02－－酶酚混合試劑3.03.03.0混勻，置37℃水浴中，保溫15min，在波長505nm處比色，以空白管調零，讀取標準管及測定管吸光度。【計算】 【參考范圍】 空腹血清葡萄糖為3.89～6.11mmol/L 。【臨床意義】 1．生理性高血糖可見攝入高糖食物后，或情緒緊張腎上腺分泌增加時。 2．病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常見于胰島素絕對或相對不足的糖尿病患者。 (2) 內分泌腺功能障礙：甲狀腺功能亢進，腎上腺皮質功能及髓質功能亢進。引起的各種對抗胰島素的激素分泌過多也會出現(xiàn)高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，現(xiàn)已歸入特異性糖尿病中。 (3) 顱內壓增高：顱內壓增高刺激血糖中樞，如顱外傷、顱內出血、腦膜炎等。 (4) 脫水引起的高血糖：如嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。 3．生理性低血糖 見于饑餓和劇烈運動。 4．病理性低血糖(特發(fā)性功能性低血糖最多見，依次是藥源性、肝源性、胰島素瘤等) (1) 胰島β細胞增生或胰島β細胞瘤等，使胰島素分泌過多。 (2) 對抗胰島素的激素分泌不足，如垂體前葉功能減退、腎上腺皮質功能減退和甲狀腺功能減退而使生長素、腎上腺皮質激素分泌減少。 (3) 嚴重肝病患者，由于肝臟儲存糖原及糖異生等功能低下，肝臟不能有效地調節(jié)血糖。【注意事項】 1．葡萄糖氧化酶對β-D葡萄糖高度特異，溶液中的葡萄糖約36%為α型，64%為β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的變旋反應。國外某些商品葡萄糖氧化酶試劑盒含有葡萄糖變旋酶，可加速這一反應，但在終點法中，延長孵育時間可達到完成自發(fā)變旋過程。新配制的葡萄糖標準液主要是α型，故須放置2h以上(最好過夜)，待變旋平衡后方可應用。 2．葡萄糖氧化酶法可直接測定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。因為尿液中尿酸等干擾物質濃度過高，可干擾過氧化物酶反應，造成結果假性偏低。 3．測定標本以草酸鉀－氟化鈉為抗凝劑的血漿較好。取草酸鉀6g，氟化鈉4g。加水溶解至100ml。吸取0.1ml到試管內，在80℃以下烤干使用，可使2～3ml血液在3～4天內不凝固并抑制糖分解。 4．本法用血量甚微，操作中應直接加標本至試劑中，再吸試劑反復沖洗吸管，以保證結果可靠。 5．嚴重黃疸、溶血及乳糜樣血清應先制備無蛋白血濾液，然后再進行測定。【評價】 線性范圍至少可達22.24mmol/L，回收率94%～105%，批內CV為0.7%～2.0%。批間CV為2%左右，日間CV為2%～3%。葡萄糖氧化酶法與己糖激酶法比較，73份標本葡萄糖氧化酶法均值為8.31mmol/L，已糖激酶法均值8.21mmol/L，相關系數(shù)為0.9986，回歸方程y=1.0026x－2.29。 本法測定葡萄糖非常特異，從原理反應式中可知第一步是特異反應，第二步特異性較差。誤差往往發(fā)生在反應的第二步。一些還原性物質如尿酸、維生素C、膽紅素和谷胱甘肽等，可與色原性物質競爭過氧化氫，從而消耗反應過程中所產生的過氧化氫，產生競爭性抑制，使測定結果偏低。然而，在本法的測定條件下，溶血標本血紅蛋白的濃度達10g/L，黃疸標本膽紅素濃度達342μmol /L，維生素C小于30mg/L，均不影響測定結果。氟化鈉濃度達2g/L不干擾測定結果。標本中含尿素濃度達46.7mmol/L，尿酸濃度達2.95mmol/L，肌酐濃度達4.42mmol/L。半胱氨酸濃度達3.30mmol/L，甘油三酯濃度達5.6mmol/L，膽固醇4.40 mmol/L，對測定結果均無顯著影響。 左旋多巴100mg/L，維生素C 5mg/L以上，谷胱甘肽100mg/L時，可引起負誤差；半胱氨酸達10mmol/L時，產生相當0.72mmol/L葡萄糖的正誤差。